高效液相色谱法测定7-氨基头孢烷酸含量

一、7-氨基头孢烷酸简介：

   7-氨基头孢烷酸(7ACA)是很重要的头孢原料药中间体。其分子结构(见图1)。在其生产过程中，除主要的组份7ACA外。还含有少量的去乙酰7-氨基头孢烷酸(D-7ACA)、去乙酰氧72氨基头孢烷酸(DO-7ACA)、头孢烷酸(CPC)。成都科捷应用研究所采用反相高效液相色谱法分离测定了7ACA的含量及其有关物质，在较短时间内完成分离测定，重复性、精密度及可靠性良好,可用于该品的质量控制。
 
二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置
LC-10Tvp高压恒流泵：2台
SPD-10Tvp紫外检测器：1台
SCL-10Tvp 系统控制器：1台
7725i手动进样阀： 1套
色谱工作站：1套    （VI2010、N2000、N3000选用）
液相色谱柱：1支     （C18 4.6*250mn,5um）
微量进样器：1支     （50ul/100ul）
   进样支架  ：1只     （进样阀用）
三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点
LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是成都科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美G先进技术开发设计，G内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，**大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析*域。
 
主要特点
    丰富的功能——符合客户对分析的不同需求
    硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
    **的性能——满足客户对仪器的严格要求
    检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。
    VI2010工作站符合多种法规要求。
    可靠的结果——满足客户对结果的准确要求
    与进口仪器做对比试验,分析结果具有高度的一致性。
    简便的操作——便于客户对软件的熟练操作
    软件采用多窗口模式，操作方便。
    精美的外观——满足客户对仪器的视觉要求
    外形精美，带来视觉上的享受。
技术指标

LC-10Tvp高压恒流输液泵
输液方式	微体积串联双柱塞
**大输液压力	0～9999Psi
流量设定范围	0.001～9.999ml/min   （以0.001ml/min步长调节流量）
流量设定值误差	≤0.5%
流量稳定性误差	≤0.2%RSD
压力脉动	小于15Psi   （流量1mL/min，压力600～1600Psi 。）
泵密封性	压力为5400Psi，时间为10min，压降小于400Psi 。
时间程序功能	有
尺寸	W260×H130×D420mm
重量	11kg
使用环境温度范围	4～40℃
SPD-10Tvp紫外可见可变波长检测器
波长范围	190nm～700nm
波长示值误差	≤±1nm
波长重复性误差	≤±0.1nm
动态噪声	≤ ±0.75×10-**U  （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。）
静态噪音	≤ ±0.5×10-**U  （空池，响应时间1秒，20℃ 。）
动态基线漂移	≤±1×10-4AU/h   （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。）
静态基线漂移	≤0.5×10-4  （空池，响应时间1秒，20℃ 。）
线性范围	≥104
**小检测浓度	≤1×10-9g/mL  （萘/甲醇溶液）
定性重复性	RSD6≤ 0.1%
定量重复性	RSD6≤ 0.5%
光谱带宽	6nm
流通池体积	8μL
光程	10mm
时间程序功能	有
尺寸	W260×H130×D420mm
重量	11kg
使用环境温度范围	4～40℃

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四、高效液相色谱法测定7-氨基头孢烷酸含量检测方法
1　仪器与试剂
成都科捷LC-10Tvp高效液相色谱仪
瑞士梅特勒AG245电子天平(十万分之一)
PHS225酸度计(上海雷磁仪器厂)
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)
Milli-Q纯水器(Millipore)
乙腈为色谱纯试剂(德GMerck公司)
醋酸钠、冰醋酸均为分析纯试剂。
7ACA、D27ACA、DO27ACA、CPC对照品均由意大利进口,其中7ACA含量为96.1%,批号392001029。
2　色谱条件　
色谱柱:C18色谱柱(416mm×250mm,5um);
流动相:0.02mol/L醋酸钠(用醋酸调pH**5.5)2乙腈(930∶70);柱温:35℃,样品池温度:8℃;检测波长:263nm;流速:0.7mL・min-1;进样量:10uL
3　实验方法与结果
3.1　系统适用性试验　
在该色谱条件下混合对照品及样品色谱图(见图2、3)。从图中可以看出,各峰之间均达到基线分离,且样品各峰的保留时间同对照品各峰的保留时间一致。
 

3.2　线性关系　精密称取7ACA对照品适量,加流动相溶解定容后配成2mg/mL的储备液，分别取储备液用流动相稀释成40、120、160、200、240、280、360ug/mL的溶液，各进样10uL,记录峰面积，以峰面积y对浓度x(ug/mL)作线性回归，得回归方程:y=34960x-107535，r=0.9999，表明在40～360ug/mL范围内线性关系良好
3.3　样品测定　取本品约20mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释**刻度，摇匀，取10uL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对品适量,同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中的7ACA含量，以峰面积归一法计算有关物质的含量，结果(见表)。
 
 
五、高效液相色谱法测定7-氨基头孢烷酸含量结果
根据上述资料表明，成都科捷应用研究所研发的方法简便、快速，灵敏度高，专一性强，线性范围广，回收率良好，流动相便宜。可做为7-氨基头孢烷酸含量及其有关物质的测定方法，为中间体的质量控制提供了参考。